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闡述了熒光分光光度計檢出限測量結果的不確定度評定過程和方法， 對不確定度來源進行分析， 并 終給出測量結果的擴展不確定度。

熒光分光光度計是用來測定熒光物質的性質和含量 的分析儀器， 具有靈敏度高、 選擇性強、 用樣量少、 方 法簡便、 工作曲線線性范圍寬等優點， 可以廣泛應用于 生命科學、 有機和無機化學等領域。 1 概述 1.1 測量依據 根據 JJG 537—2006 《熒光分光光度計》 的相關要 求進行測量。 1.2 環境條件 環境溫度 （20±10） ℃， 且相對穩定； 相對濕度不 大于 85%； 電源電壓 (220±22) V。 1.3 計量標準 計量標準為硫酸奎寧熒光標準物質， 標準物質號： GBW (E) 130100； 標準物質標準值： 98.6%； 相對擴展 不確定度： Urel=0.5%， k=2。 1.4 被測對象 熒光分光光度計， 對 于 配 制 A 類單色器的儀器， 其檢出極限為不大于 5×10-10 g/mL； 對于配制 B 類單色 器的儀器， 其檢出極限為不大于 1×10-8 g/mL。 1.5 測量方法 按照規程規定的檢定條件， 使儀器處于運行狀 態。 用 0.05 mol/L 硫酸溶液做空白溶液， 選取規定濃度 硫酸奎寧標準溶液。 靈敏度置， 選擇適當的狹縫 寬度。 根據激發波長在 350 nm、 發射波長在 450 nm 左 右的原則， 設定兩側的波長或選擇濾光片。 對空白溶液 與標準溶液進行連續交替 11 次測量。 按規程中的公式 計算儀器檢出限。 2 數學模型及不確定度傳播率 2.1 數學模型 被測熒光分光光度計檢出限的計算公式為： （1） 式中： DL——檢出限； ——11 次測量的平均熒光強度； c——標準溶液的質量濃度； s——單次測量的標準偏差。 2.2 不確定度傳播率 儀器檢出限的不確定度傳播率計算公式為： （2） 2.3 靈敏系數 公 式 （2） 中的 靈 敏 系 數 c1= ， c2= ， c3= 。 3 標準不確定度評定 按照規程要求， 以一臺型號為 F2500 的熒光分光光 度計為例， 其檢出限測量數據如表 1 2 所示 F ?。

4 標準不確定度的評定 4.1 溶液測量重復性引入的不確定度分量 u （s） 計算出單次測量的標準偏差 s=0.553， 規程中規定 測量重復性次數為 3 次， 則溶液測量重復性引入的不確定度分量 = =0.319 4.2 由儀器的直接測量結果引入的不確定度分量 （1） 用儀器直接測量空白溶液， 由于時間、 環境溫 度等影響， 引起零點漂移的偏差不超過 0.5%， 其值符 合均勻分布， 其不確定度為 =0.5%× =0.239 1 （2） 用儀器直接測量標準溶液， 由于時間、 環境溫 度等影響， 引起零點漂移的偏差不超過 1.5%， 其值符 合均勻分布， 其不確定度為 =1.5%× =0.911 5 4.3 由標準溶液的稀釋配制引入的不確定度分量 u （c） 標準溶液濃度計算公式為： c= （3） 式中： c——標準溶液濃度； m——硫酸奎寧標準物質的質量； V——稀釋體積。 （1） 配制 500 mL 濃度為 1×10-5 g/mL 的硫酸奎寧儲 備液時， 稱量硫酸奎寧固體標準物質的質量為 5.00 mg。 天平稱量引入的不確定度為天平檢定的大允許誤差± 0.5 mg， 由天平稱量引入的不確定度分量為 u （c1） = mg， 符合正態分布。 傳播系數為 mL-1 ， 則 u （c1） =5.8×10-7 g/mL （2） 配置 500 mL 濃度為 1×10-5 g/mL 的硫酸奎寧儲 備液時， 500 mL 容量瓶檢定合格達到 A 級的大允許 誤差為±0.25 mL， 由容量瓶定容引起的不確定度分量為 u （c2） = =0.144 mL， 符合 正 態 分 布 。 傳 播 系 數 為- ， 則 u （c2） =2.9×10-9 g/mL 4.4 二級標準物質硫酸奎寧引入的不確定度分量 u （c3） （1） 硫 酸奎寧熒光標準物質的不確定度為 Urel= 0.5%， k=2 （根據標物證書得到）， 分量為 0.25%， 按照 稱樣量換算成不確定度為 0.002 5×0.005=1.25×10-5。

g， 傳播系數為 mL-1 ， 則 u （c3） =5.8×10-7 g/mL （2） 標準溶液是由儲備液按 1： 10、 1： 10、 1:100 分 3 次稀釋得到的， 在此過程中所用到的玻璃量器有 25 mL 移液管、 250 mL 容量瓶等， 其合成后的不確定 度分量 u （c4） =1×10-11 g/mL 4.5 標準不確定度一覽表5 合成標準不確定度 以上標準不確定度分量合成的標準不確定度 uc （DL） = =5.2×10-9 g/mL 6 擴展不確定度 測量熒光分光光度計檢出限的相對擴展不確定度為 U=1.0×10-8 g/mL， k=2 7 結束語 由計算結果可以看出， 以校準熒光分光光度計檢出 限項目為例， 標準溶液配制、 標準物質的稱量和標準物 質本身的不確定度 3 個因素對評定結果的影響較大。 這 就要求選取硫酸奎寧標準物質時盡量選取不確定度小的 一級標準物質， 稱量標準物質時盡量選取有效數字多的 一級天平， 同時在標準溶液配制時選用經過檢定的玻璃 量具仔細稱量， 盡量減小人為誤差， 這樣才能對后的 結果做出準確評定。